Proteínas I (ensayos de reconocimiento de proteínas) Proteínas II (diálisis)

PROTEÍNAS I (ensayos de reconocimiento de proteínas):

• Colocamos aproximadamente 25ml de leche descremada en un baso de bohemia.

• Luego calentamos hasta llegar aproximadamente a los 40º agitando con una varilla de vidrio.
• Agregamos Ácido Etanoico 2,0M (gota a gota) agitando en forma continua hasta llegar a un estado solido.

• Separamos el estado solido del liquido, palpándolo con papel de filtro. 

• Separamos en dos porciones el solido obtenido y lo colocamos dentro de dos tubos de ensayo.

Segunda parte del procedimiento:

Reacción de Biuret: 

Agregamos sobre la Caseina de uno de los tubos 20 gotas de NaOH al 10%.

Luego agregamos 2 gotas de solución de CuSO4 al 1%.

La observación da positiva ya que se ve claramente su color violeta: debido a la formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que 

forma parte de los enlaces peptídicos 

Reacción xantoproteico:

Colocamos sobre la Caseina del segundo tubo 10 gotas de HNO3 concentrado y aguardamos unos minutos agitando para que la reacción se produzca y obtener resultados:

La observación da positivo ya que se ve claramente su color amarillo, se debe a la formación de un compuesto aromático nitrado de color amarillo, cuando las proteínas son tratadas con ácido nítrico concentrado. Generalmente, se forma primero un precipitado blanco que cambia a amarillo al calentarlo.

El color se empieza a tornarse anaranjado cuando la solución se vuelve básica. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos bencénicos, tirosina, fenilalanina y triptofano, obteniéndose nitrocompuestos de color amarillo, que se  vuelven anaranjados en medio fuertemente alcalino (formación del ácido pirámico o trinitrofenol). En esta prueba se produce la nitración del anillo bencénico presente en dichos aminoácidos. 

Muestras de ambas reacciones:

Objetivo: 

Extraer la Caseina de la leche y reconocer su naturaleza proteica 

Materiales:

• Vaso de bohemia
• Varilla de vidrio 
• Mechero
• Soporte
• Tela metálica
• Gradilla
• Tubos de ensayos 
• Termómetro
• Papel de Filtro

Sustancias:

• Leche descremada
• Ácido Etanoico 2.0M
• Hidróxido de Sodio al 10 %
• Sulfato Cúprico al 1%
• Ácido Nítrico concentrado 

Tabla de los resultados de las muestras

Muestra	Biuret	Xantoproteico
Caseína	Positivo	Positivo
Gelatina	Positivo	Negativo
Ovoalbumina	Positivo	Positivo
Apartamos	Negativo	Negativo
Glicina	Negativo	Negativo
Proteína de suero	Positivo	Positivo

Información sobre estructura y función de las muestras sometidas a ensayo:

Caseina:

Es una proteína de carácter ácido debido a su elevada proporción de aminoácidos ácidos (PI=4,6). La caseína humana es más rica en cistina y en glúcidos que la de vaca lo que la hace más apropiada para el bebe. Reacciona con las bases formando caseinatos utilizados en la industria para la fabricación de colas y adhesivos. También se utilizan en la industria textil. La caseína recipita por acción de los ácidos. Esto puede ocurrir a través de la formación de ácido láctico por la acción bacteriana sobre la lactosa o mediante el agregado de un ácido hasta alcanzar el pH correspondiente a su punto isoeléctrico. La precipitación puede producirse por la acción enzimática de la quimiotripsina.

GELATINA

                                              

Biuret(Positivo)                                                                          Xantoproteica(Negativa)

Ovoalbumina 

Biuret(Positivo)                                           Xantoproteico(Positivo)

                             

    Ovoalbumina en el mechero 

APARTAMOS

En blanco Xantoproteico y en azul se difiere Biuret

GLICINA

En blanco Xantoproteico y en azul Biuret

PROTEÍNAS DEL SUERO

      Biuret(Positivo)                                                          Xantoproteica(Positivo)                            

 

PROTEÍNA II (DIÁLISIS)

Fundamento del procedimiento: dentro del cristalizador se encuentra el dializador (cacero), luego introducimos agua destilada en el cristalizador y en el dializador colocamos solución de ovoalbumina mas sal.

Sacamos una muestra del interior (dializador), lo colocamos en un tubo de ensayo seguido de 3 gotas de nitrato de plata y su resultado fue positivo (tubo de ensayo izquierdo)

Extrajimos una muestra del exterior (cristalizador), lo colocamos en un tubo de ensayo seguido de 3 gotas de nitrato de plata y su resultado fue positivo nuevamente (tubo de ensayo derecho) , atravesando el papel celofán.

A continuación sacamos una muestra del interior (dializador) y le agregamos 20 gotas de NaOH y 4 gotas de CuSO4. Su reacción fue positiva (violeta).

Para finalizar extraemos una muestra del exterior (cristalizador), colocamos 20 gotas de NaOH y 4 gotas de CuSO4. Su reacción fue negativa (azul).

CONCLUSIÓN: El preparado con nitrato de plata (AgNo3) de la muestra obtenida del agua del cristalizador dio positiva, lo cual demuestra  que el cloruro de sodio atravezo la membrana. El preparado de biuret dio negativo ya que las proteínas no atravesaron la membrana del dializador. 

                                                 Integrantes: Ana Karen Perez, Paula Larrosa, Kamila Russi,Claudia Molina 6ºCB1